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液相色譜柱的使用注意事項(xiàng)
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更新時(shí)間：2017-03-07
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液相色譜柱的使用：
液相色譜柱在使用前，進(jìn)行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。但要留意： 液相色譜柱柱性能可能由于所使用的樣品、活動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測試時(shí)是按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠測試所使用的條件是*條件)，只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。
1、樣品的前處理：
a、使用活動(dòng)相溶解樣品。
b、使用予處理柱除往樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。
c、使用0.45μm的過濾膜過濾除往微粒雜質(zhì)。
2、活動(dòng)相的配制：
液相色譜是樣品組分在柱填料與活動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求活動(dòng)相具備以下的特點(diǎn)：
a、活動(dòng)相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中(或長時(shí)間保存在柱中)。
b、活動(dòng)相具有一定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。
c、活動(dòng)相的黏度要盡量小，以便在使用較長的分析柱時(shí)能得到好的分離效果；同時(shí)降低柱壓降，延長液體泵的使用壽命(可運(yùn)用進(jìn)步溫度的方法降低活動(dòng)相的黏度)。
d、活動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器，使用對紫外吸收較低的溶劑配制。
e、活動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低，否則輕易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無法進(jìn)行。
f、在活動(dòng)相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣。除往溶解在活動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止活動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
3、活動(dòng)相流速的選擇：
因柱效是柱中活動(dòng)相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱，要追求*柱效，使用*流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml/min，對于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml/min為佳。
當(dāng)選用*流速時(shí)，分析時(shí)間可能延長。可采用改變活動(dòng)相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時(shí)間(如使用反相柱時(shí)，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量)。
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